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低速離心機(jī)在提取細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核蛋白中的應(yīng)用
時間：2018-06-06
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來源：四川蜀科儀器有限公司
蜀科低速離心機(jī)操作簡單、運(yùn)行平衡、性能穩(wěn)定、安全可靠，入選“國產(chǎn)好儀器”，在臨床醫(yī)學(xué)，放射免疫、生物化學(xué)、食品衛(wèi)生、環(huán)保等科研領(lǐng)域都有廣泛應(yīng)用。今天來介紹一下低速離心機(jī)在提取細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核蛋白中的應(yīng)用。
提取細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核蛋白的操作步驟如下：
1、決定細(xì)胞生長狀態(tài)，細(xì)胞生長狀態(tài)應(yīng)該是80%或者更好：2、用蜀科離心機(jī)以1500r/min離心5min
3、棄上清液，用等體積的冷PBS洗細(xì)胞，像步驟2那樣，反復(fù)3次
4、根據(jù)估計的沉淀量加入5倍體積的isotonic lysis buffer到細(xì)胞顆粒中，使細(xì)胞溫和懸浮，盡量避免泡沫
5、加入裂解液lysis buffer在懸浮的細(xì)胞中，并放在冰上15min讓細(xì)胞膨脹，可以通過顯微鏡檢查
6、對于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中膨脹的細(xì)胞，加入10%的IGEPAL CA-630使最后的濃度達(dá)到0、3%，混勻，加的時候要溫和
7、立即用蜀科低速離心機(jī)離心（量大的可以用1、5ml的 EP管，以5500r/min離心30s；量大的可以用50ml的管子以5500r/min離心2min）
8、轉(zhuǎn)移上清液（細(xì)胞質(zhì)蛋白）到一個新的冷凍管中
9、用懸浮顆粒5倍體積的isotonic lysis buffer懸浮細(xì)胞，并混勻。
10、用離心機(jī)離心細(xì)胞懸浮液，以1500r/min離心5min，移掉上清液
11、用2/3倍體積的extraction buffer懸浮顆粒
12、把管子放置在震蕩混勻器上，以700r/min，15min震蕩混勻，接著以1400r/min,15min,整個過程要仔細(xì)，避免泡沫產(chǎn)生
13、以9400r/min離心15min，低溫離心完后轉(zhuǎn)移上清液到一個新的冷凍離心管中
14、分成幾份用液氮冷凍，并且保存起來（長期保存應(yīng)放在-80℃上，短期保存要放在-20℃上）。
蜀科儀器專注于離心機(jī)的研發(fā)、生產(chǎn)、銷售，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷海內(nèi)外，低速離心機(jī)各項指標(biāo)更是處于行業(yè)優(yōu)勢地位，還可提供定制服務(wù)，歡迎來電咨詢。
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